| Tez Künye | Durumu | ||
| Cryptosporidium parvum genotiplerinin ishalli çocuklarda çeşitli yöntemlerle tanımlanması / Identification of cryptosporidium parvum genotypes in children with diarrhea by using various techniques Yazar:HANDE ŞİMŞİR Danışman: DOÇ. DR. SİBEL SÜMER Yer Bilgisi: Hacettepe Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı Konu:Biyoloji = Biology ; Parazitoloji = Parasitology Dizin: | Onaylandı Yüksek Lisans Türkçe 2006 89 s. | ||
| Cryptosporidium cinsine ait protozoan parazitler, insanların, evcil hayvanların ve diğer omurgalıların gastrointestinal yollarını infekte eder. Sağlıklı insanlarda infeksiyon kendi kendine geçerken,C. parvum, yetersiz beslenen çocukların ve immün sistemi baskılanmış hastaların hayatlarını tehdit edebilen kronik ishale sebep olabilir. İnsanda infeksiyon yapan etkenlerinin büyük bir kısmını, C. parvum Tip 1 veya Tip 2 olarak adlandırılan iki genotipten biri oluşturmaktadır. Bu genotipler son zamanlarda farklı türler olarak tanımlanmış olup değişik konakçılarda farklılıklar göstermektedir. Doğada Tip 1 yalnızca insanlarda bulunmuş iken Tip 2 geviş getiren ve kemirgenleri içeren farklı memeli türlerini infekte etmektedir. Sadece son birkaç yıldır, temeli moleküler biyolojiye dayanan metotlar, Cryptosporidium türlerinin ve genotiplerinin tanımlanmasına izin vermiştir. Bu çalışmanın amacı, Cryptosporidium’ un tanısında moleküler tekniklerin güvenirliğini saptamak ve bunların duyarlılık açısından da geleneksel mikroskopik boyama tekniklerine göre üstünlüğünü ortaya koymaktır. Bu çalışma için, Ankara Dışkapı Çocuk Hastalıkları Eğitim ve Araştırma Hastanesi’nde bulunan ishalli 256 çocuktan dışkı örnekleri toplanmıştır. Toplanan dışkı örneklerinde Modifiye Asit-Fast boyama metodu ile ooskistler tespit edildikten sonra, örneklerin görüntülenmesi için ELISA ve Kromotografik Lateral Flow Immunassay yöntemleri kullanılmıştır. COWP ve SSUrRNA genleri PCR yöntemi kullanarak çoğaltılmış ve sonra RFLP analiz yöntemiyle örneklerde Cryptosporidium türlerinin ayırt edilmesi gerçekleştirilmiştir. RFLP analizinde Cryptosporidium’ un türleri ve genotipleri tanımlamak için Rsa I, Ssp I ve Vsp I enzimleri kullanılmıştır. Çalışılan örneklerde, sadece C. parvum türü ve bunun iki genotipi tespit edilmiştir. Cryptosporidium’un pozitiflik prevelansı yaklaşık % 4.7 olarak bulunmuştur. Anahtar Kelimeler : Cryptosporidium parvum, COWP, 18S rRNA, PCR-RFLP, ELISA, Kromotografik Lateral Flow Immunassay Danışman : Doç. Dr. Sibel Sümer, Hacettepe Üniversitesi, Biyoloji Bölümü, Moleküler Biyoloji Anabilim Dal | |||
| Protozoon parasites of the genus Cryptosporidium, infect the gastrointestinal tract of humans, domestic animals and other vertebrates. While the infection is self-limiting in otherwise healty people, in malnourished children and immunocompromised patients C. parvum may cause a chronic diarrhea that can be life threatening. The vast majority of human infections are caused by one of two genotypes, varyingly designated as C. parvum Type 1 or Type 2.They have recently been assigned to different species and differ in their host range. In nature, Type 1 has only been detected in humans, whereas Type 2 infects many mammalian species, including ruminants and rodents. Only in the last few years, molecular biology-based methods have allowed the identification of Cryptosporidium species and genotypes. The aim of this study was to determine the reliability of molecular techniques and to show that the molecular techniques are more sensitive than conventional microscobic staining techniques in the diagnosis of Cryptosporidium. For this study, we collected feces samples from 256 children with diarrhea from Ankara Dışkapı Education and Research Hospital of Child Diseases. After detecting the oocysts by modified acidfast staining method, we also used ELISA and Chromotographic Lateral Flow Immunassay methods to screen the samples. COWP and SSUrRNA genes encompassing the hypervariable region was amplified by PCR and then RFLP analysis was performed for distinguishing the Cryptosporidium species in the samples. In RFLP analysis Rsa I, Ssp I and Vsp I enzymes were used to identify the species/genotypes of Cryptosporidium. In the samples studied, we have determined only Cryptosporidium parvum and its two genotypes. The prevalance of Cryptosporidium positivity was about 4.7%. Keywords : Cryptosporidium parvum, ,COWP, 18S rRNA , PCR-RFLP, ELISA, Chromotographic Lateral Flow Immunassay Advisor : Assoc. Prof. Sibel Sümer, Hacettepe University, Department of Biology, Molecular Biology Section | |||