| Tez Künye | Durumu | ||
| The roles of protein kinase D2 in chemoresistant breast cancer cell lines / Protein kinaz D2’nın ilaç dirençli meme kanseri hücre hatlarındaki işlevleri Yazar:AKTAN ALPSOY Danışman: PROF. DR. UFUK GÜNDÜZ Yer Bilgisi: Orta Doğu Teknik Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı Konu:Biyoloji = Biology Dizin: | Onaylandı Yüksek Lisans İngilizce 2014 111 s. | ||
| Kemoterapi, kanser tedavisinde en etkin ve en çok başvurulan yöntemdir. Ancak, tümörün kemoterapi ilaçlarına karşı gösterdiği direnç, başarılı kemoterapi uygulamalarının önündeki en önemli engellerden biridir. Çoklu ilaç dirençliliği yapısal ve işlevsel olarak birbirinden farklı olan ilaçlara karşı, baştan beri varolan ya da sonradan edinilen dirençlilik olarak tanımlanır. Çoklu ilaç dirençliliği çeşitli mekanizmalarla gerçekleşebilir. Bunlardan en yaygın olanları; ABC sınıfı taşıyıcı proteinler vasıtasıyla ilacın hücre dışına pompalanması, ilacın metabolize edilerek etkisiz hale gelmesi, ilacın toksik etkisinin ölümle sonuçlanmaması, ilacın yol açtığı DNA hasarının çabuk giderilmesi şeklinde sıralanabilir. Sözkonusu mekanizmalara bakıldığında çoklu ilaç dirençliliği probleminin hücrenin metabolik ve diğer düzenleyici yolakları ile yakından ilişkili olan çok yönlü bir problem olduğu göze çarpmaktadır. Tüm bunların yanında çoklu ilaç dirençliliğinin agresif tümörlerde gözlenen invazyon ve motilite ile bağlantılı olduğu gösterilmiştir. Protein kinaz D2, üç üyeden oluşan protein kinaz D ailesinin bir üyesidir. PKD ailesinin üyeleri, benzer işlevler üstlenebildikleri gibi herbirinin kendilerine özgü işlevleri de olabilir. PKD üyeleri hücre çoğalması, sağkalımı, anjiyojenez, hücre hareketliliği gibi hücre için gerekli ve aynı zamanda kanser ile bağlantılı olaylarda rol alırlar. Gliyoblastom, lösemi, kalın bağırsak kanseri, pankreas kanseri ve meme kanseri gibi kanser türlerinde PKD üyelerinin zaman zaman benzer zaman zaman da birbirine karşıt roller üstlendikleri gözlenmiştir. Özellikle meme kanserinde PKD2 ve PKD3 enzimlerinin tümör destekleyici, PKD1’in ise tümör baskılayıcı roller üstlenebildikleri düşünülmektedir. Bu çalışmamızda, çoğu meme kanseri alt türünde yaygın olarak gözlenen PKD üyesi PKD2 ilaç dirençli hücrelerde karakterizasyonu yapılmıştır. PKD2’nin; reseptör statüsü farklı olan meme kanseri hücre hatlarında ve MCF7 hücre hattının ilaç dirençli türevlerinde ifade edildiği saptanmıştır. Bazal PKD2 aktivitesinin ise hücre hatları arasında farklılık gösterdiği; aktif PKD2 düzeyinin ilaç dirençli MCF7 türevlerinde, MCF7 hattına göre daha fazla olduğu tespit edilmiştir. Buradan, yüksek PKD2 aktivitesinin ilaç dirençliliği ya da ilaç dirençliliğinin yol açtığı diğer fenotipler ile ilişkili olabileceği çıkarımı yapılmıştır. Hücre çoğalma analizi, PKD2’nin susturulduğu MCF7/DOX türevinin doksorubisin dirençliliğinde bir değişim olmadığını göstermiştir. Ayrıca, PKD2’nin susturulması, MCF7/DOX hücrelerinde apoptoz ve çoklu ilaç dirençliliği ile ilişkili kimi genlerin ifadelerinde değişikliğe yol açmamıştır. MCF7/DOX hücreleri, MCF7 hücrelerinden farklı olarak, yüksek oranda epitelyal-mezenşimal geçiş markörleri ifade eden motil ve invazif karakterde hücrelerdir. PKD2 susturulduğunda MCF7/DOX hücrelerinin yönlendirilmiş migrasyonunda düşüş saptanmıştır. Sonuçlar, PKD2’nin geçici susturulmasının PKD2 ifadesinin önemli ölçüde azalttığını ancak bu etkinin MCF7/DOX hücrelerinin ilaç dirençliliğini etkilemediğini; yönlendirilmiş migrasyonu ise azalttığını göstermiştir. | |||
| Even though chemotherapy keeps its position as the most preferred and potent strategy of cancer treatment, resistance of tumor to the anti-neoplastic drug poses an obstacle for chemotherapy success. Multidrug resistance (MDR) is a phenomenon that is defined as the intrinsic or acquired resistance against structurally and functionally unrelated drugs. Acquisition of multidrug resistance can be through several distinct mechanisms such as increased drug efflux by ABC transporters, increased drug detoxification through phase I and II enzymes, altered death pathways and increased damage repair, making MDR a multifaceted problem that remodel many regulatory or metabolic circuits. MDR phenotype has also been linked to increased aggressiveness marked by mobility and invasiveness or vice versa. Protein kinase D2 (PKD2) is one of the isoforms in three-membered serine/threonine kinase family, PKD. PKD family members can possess redundant as well as specific roles on proliferation, survival, angiogenesis and motility, the events that are relevant to cancer. In glioblastoma, leukemia, colorectal, pancreas and breast cancer, tumor promoting and suppressing roles of PKD members have been shown. In particular, breast cancer, the most common cancer type in women, PKD2 and PKD3 appear to have oncogenic roles while PKD1 possesses tumor-suppressive functions. Specifically, PKD2 seems to be ubiquitous in many breast cancer types, while PKD1 and PKD3 are not. To this end, we aimed to characterize the ubiquitous member, PKD2, in a panel of breast cancer cell lines. We found that the expression of PKD2 does not differ between cell lines, whereas its basal level activity is higher in chemoresistant MCF7 derivatives compared to parental MCF7 cell line, implying that PKD2 may have role in drug resistance and associated phenotypes. Cell proliferation assay showed that PKD2 downregulation does not affect the drug resistance in MCF7/DOX cells. PKD2 knockdown also does not significantly change the expression of potential PKD targets that are implicated in MDR and apoptosis. MCF7/DOX cells are phenotypically different from parental cell line such that they have higher expression of epithelial to mesenchymal transition markers, higher mobility and invasive characteristics. Since PKD2 is also implicated in motility we checked whether PKD2 downregulation influences the migration of MCF7/DOX cells towards a chemoattractant. The migration assay showed that PKD2 downregulation suppresses the migration of MCF7/DOX cells. The data implied that under this experimental setup PKD2 did not alter the drug resistance whereas it changes the migration potential of doxorubicin resistant MCF7 cell line. Further research is needed to uncover the roles of other isoforms PKD1 and PKD3 as well as upstream regulators of PKD members in chemoresistance. | |||