| Tez Künye | Durumu | ||
| Geobacillus stearothermophilus 12 suşundan iki farklı alfa-L-arabinofuranosidaz geninin klonlanması, ekspresyonu, saflaştırılması ve karakterizasyonu / Cloning, expresion, purification and characterization of two different alpha-L arabinofuranosidase genes from Geobacillus stearothermophilus 12 strain Yazar:İCLAL ŞAHİN Danışman: PROF. DR. SABRİYE ÇANAKÇI Yer Bilgisi: Karadeniz Teknik Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Biyoloji Ana Bilim Dalı Konu:Biyoloji = Biology Dizin: | Onaylandı Yüksek Lisans Türkçe 2014 67 s. | ||
| Gerçekleştirilen bu çalışmada, daha önce yapılan çalışmalarla iki adet arabinofuranosidaz enzimine sahip olduğu belirlenen Geobacillus stearothermophilus 12 bakterisinin bu her iki enzimine ait olan gen dizileri öncelikle ortaya çıkarıldı. Her bir gen bir E. coli ekspresyon vektörü olan pET28a’ya klonlanarak E. coli BL21 pLys hücresi içinde ekspres edildi. Ekspres edilen proteinler sahip oldukları histidin kuyruktan faydalanılarak afinite kromotografisi yardımıyla saflaştırıldı. Saflaştırılan proteinlerin karakterizasyonları gerçekleştirildi. Her iki enzimin de 56-57 kDa civarında olduğu, optimum çalışma sıcaklıklarının birbirlerinden farklı olup Abf1’in optimum olarak 65°C’de, Abf2’nin ise 50°C’de aktivite gösterdiği, optimum çalışma pH’larının ise Abf1’in 6,5; Abf2’nin ise 5,5 olduğu belirlendi. Abf 1’in 6,0’nın üzerindeki pH’larda uzun süre kararlı olduğu, buna karşı Abf2’nin pH kararlılığının iyi olmadığı tespit edildi. Her iki enzimin de subtrat olarak p-NP α-L arabinofuranosidden başka bir substratı kullanmadığı görüldü. Anahtar Kelimeler: Geobacillus stearothermophilus 12, α-L arabinofuranosidaz, enzim saflaştırılması, enzim karakterizasyonu | |||
| This study, firstly, finds out the gene sequence of two arabinofuranosidase enzymes belonging to the bacteria called Geobacillus stearothermophilus 12 which has been found out to have these two enzymes in former studies. On the basis of these sequences, each gene is expressed in the cell of E. coli BL21 plys by cloning them to pET28 which is an E.coli expression vector. The proteins expressed were purified via affinity chromatography and by making use of their Histidine Tag. The characterization of these purified proteins was done. In this study, it is shown that both enzymes are about 57 kDa and that they have different optimum activation temperature. The optimum activation temperature of Abf1 is 65°C whereas it is 50°C for Abf2. Moreover, it is found out that the optimum PH activation of Abf1 is 6,5 and it is 5,5 for Abf2. It is also identified that Abf1 is stable a long time at pH over 6,0 but the pH stability of Abf2 is not good. It is also observed that both enzymes do not use any substrate other than pNP a-L arabinofuranosidase. Key Words: Geobacillus stearothermophilus 12, α-L arabinofuranosidase, enzyme purification, enzyme characterization | |||