| Tez Künye | Durumu | ||
| Development of mutant human immunoreactive trypsinogen (IRT) for use in immunoassays / İmmün test çalışmalarda kullanmak için mutant insan immünreaktif tripsinojen (IRT) geliştirilmesi Yazar:MUSTAFA DİVYAPICIGİL Danışman: PROF. DR. TAMER YAĞCI ; DR. ESİN AKÇAEL Yer Bilgisi: Gebze Teknik Üniversitesi / Fen Bilimleri Enstitüsü / Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı Konu:Biyoloji = Biology ; Genetik = Genetics Dizin: | Onaylandı Yüksek Lisans İngilizce 2018 85 s. | ||
| Bu tez çalışmasında Immunreaktif Tripsinojen (IRT) ELISA kitlerinde standart olarak kullanmak üzere kesim aktivitesi olmayan rekombinant IRT proteinlerinin geliştirilmesi hedeflenmiştir. IRT, yenidoğan bebeklerde kistik fibrozisin (KF) tanısı için marker olarak kullanılan bir proteindir. KF’ye ek olarak diyabet, pankreatit ve pankreas kanserinin teşhis ve takibinde, IRT biyolojik marker olarak kullanım potansyeline sahiptir. İnsan pankreas salgısı içerisinde; literatürde, tripsinojen 1 (katyonik tripsinojen, IRT1) ve tripsinojen 2 (anyonik tripsinogen, IRT2) olarak adlandırılan iki önemli IRT izoformu bulunur ve her ikisi de KF tanısında kullanılır. IRT’nin aktif formu antikorlar, diğer protein bazlı bileşenler ve hatta kendisini proteolitik aktivitesi nedeniyle kestiği için immün testlerde kullanılması zordur. Bu çalışmada, inaktif form olan tripsinojenin aktif tripsine dönüşümünü engellemek amacıyla 23. amino asit olan lizini (K) aspartik aside (D) dönüştüren K23D mutasyonu yapılmış ve proteolitik aktivitesi inhibe edilmiş rekombinant insan IRT proteinleri geliştirilmiştir. Mutasyona uğramış genler daha sonra P. Pastoris’te ürettirilmiştir. Üretilen proteinler ELISA (Enzyme-Bağlantılı İmmünosorbent Assay) ve Western Blot immün testleri ile test ve tasdik edilmiştir. Rekombinant IRT’nin, yabanıl tiple aynı antijenik özelliklere sahip olduğu ve kesim aktivitesinin bulunmadığı gösterilmiştir. Sonuç olarak, hedeflenen mutasyonla proteolitik aktivite engellenerek, immün testlerde kullanım kolaylığı getiren K23D mutasyonuna sahip rekombinant insan IRT proteini başarılı bir şekilde geliştirilmiştir. | |||
| In this thesis, it is aimed to develop recombinant IRT proteins that do not have a proteolytic activity to be used as a standard in Immunoreactive Trypsinogen (IRT) ELISA kits. IRT is a protein used as a marker for the diagnosis of cystic fibrosis (CF) in newborns. In addition to CF; diabetes, pancreatitis, and pancreatic cancer are possible fields for using IRT as a marker. According to the literature, there are two important IRT isoforms called trypsinogen 1 (cationic trypsinogen, IRT1) and trypsinogen 2 (anionic trypsinogen, IRT2) in human pancreatic juice used in the diagnosis of CF. The active form of IRT is challenging to use in immunoassays because it causes the cleavage of antibodies, other protein-based components, and even itself due to its proteolytic activity. In this study, recombinant human IRTs, that developed have K23D mutation, which changes lysine (K) residue at the 23rd position to aspartic acid (D), inhibits its activation and proteolytic activity by preventing the cleavage of inactive trypsinogen to active trypsin. Mutated genes were expressed in P. pastoris. The antigenic properties of mutant proteins were tested and confirmed by ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) and Western Blot. It has been shown that mutant IRTs have the same antigenic properties as wild-types, except the proteolytic activity. As a result, recombinant human IRT protein with K23D mutation which gains ease of use in immune tests has been successfully developed. | |||